概 述
■ 層析法――是一種使不同分子相互分離的過程,當(dāng)一混合樣品被導(dǎo)入一固定相的支持體
中,而另一流體(移動(dòng)相)通過時(shí),由于樣品各組分與固定相和移動(dòng)相相互作用的大小不同,使各組分通過固定相支持體的速率不同而得分離。
層析法的特點(diǎn):能分離一系列結(jié)構(gòu)較為相似的成分,以達(dá)到一般分離方法難以達(dá)到的
目的。
■ 層析常見種類及用途:
a.柱層析――分離量較大,主要用于分離制備;
b.薄層層析――主要用于分析鑒定,也可用于半微量制備。 c.紙層析――主要用于分析鑒定,也可用于半微量制備。
■ 層析法按分離原理大體上又可以分為
(1) 吸附層析(利用吸附能力的差別進(jìn)行分離),常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、聚酰胺等; (2) 分配層析(利用在二種不互溶的溶劑中分配比不同進(jìn)行分離),常用的支持劑為硅膠、硅藻土、纖維粉等,反相硅膠(鍵合硅膠)、液滴逆流層析則是分配層析與逆流分溶的發(fā)展;
(3) 離子交換層析(利用離子解離強(qiáng)度不同進(jìn)行分離),常用的離子交換樹脂有強(qiáng)酸性(磺酸型)、強(qiáng)堿性(季胺型)、弱酸性(羧酸型)、弱堿性(三級(jí)胺型);
(4) 電泳(利用電流通過時(shí),離子趨電性不同進(jìn)行分離),常用的有紙電泳、瓊脂電泳、凝膠電泳。
(5) 其他有氣體層析、凝膠層析、親和層析等,
■ 層析方法的選擇:
(1) 非極性的成分常選擇氧化鋁或硅膠吸附層析; (2) 極性較大則采用分配層析或弱吸附劑吸附層析;
(3) 酸性、兩性成分可用離子交換層析,有時(shí)也可用吸附層析及分配層析。
■ 各類化合物適宜的層析方法:
a. 一般生物堿的分離可用硅膠或氧化鋁層析,對(duì)極性較高的生物堿也可用分配層析,而對(duì)季胺型水溶性生物堿也可用分配層析或離子交換層析。
b. 甙類的層析分離往往決定于甙元的性質(zhì),如皂甙、強(qiáng)心甙,一般可用分配層析或硅膠吸附層析。
c. 芳香油、甾體、萜類(結(jié)合成甙除外)包括萜類內(nèi)酯,往往**氧化鋁及硅膠層析,若在氧化鋁柱上有次級(jí)反應(yīng),則宜用硅膠吸附層析。
d. 黃酮體、單寧等多元酚衍生物可用聚酰胺吸附層析。
e. 有機(jī)酸、氨基酸一般可選用離子交換層析,有時(shí)也用分配層析,有些氨基酸也可用活性炭吸附層析。
f. 多肽、多糖等大分子化合物,常用凝膠層析、親和層析、反相硅膠(鍵合硅膠)。