一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?nbsp;

1、了解色譜法分離提純有機(jī)化合物的基本原理和應(yīng)用。 

2、掌握柱層析、薄層層析的操作技術(shù)。 二、實(shí)驗(yàn)原理 

色譜法（Chromatography）亦稱色層法、層析法等。 

色譜法是分離、純化和鑒定有機(jī)化合物的重要方法之一。色譜法的基本原理是利用混合物各組分在某一物質(zhì)中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其親和性的差異，使混合物的溶液流經(jīng)該種物質(zhì)進(jìn)行反復(fù)的吸附或分配作用，從而使各組分分離。 

色譜法在有機(jī)化學(xué)中的應(yīng)用主要包括以下幾方面: 

1、分離混合物  一些結(jié)構(gòu)類似、理化性質(zhì)也相似的化合物組成的混合物，一般應(yīng)用化學(xué)方法分離很困難，但應(yīng)用色譜法分離，有時(shí)可得到滿意的結(jié)果。 

2、精制提純化合物  有機(jī)化合物中含有少量結(jié)構(gòu)類似的雜質(zhì)，不易除去，可利用色譜法分離以除去雜質(zhì)，得到純品。 

3、鑒定化合物  在條件完全一致的情況，純粹的化合物在薄層色譜或紙色譜中都呈現(xiàn)一定的移動(dòng)距離，稱比移值（Rf值），所以利用色譜法可以鑒定化合物的純度或確定兩種性質(zhì)相似的化合物是否為同一物質(zhì)。但影響比移值的因素很多，如薄層的厚度，吸附劑顆粒的大小，酸堿性，活性等級(jí)，外界溫度和展開劑純度、組成、揮發(fā)性等。所以，要獲得重現(xiàn)的比移值就比較困難。為此，在測(cè)定某一試樣時(shí)，**好用已知樣品進(jìn)行對(duì)照。 

4、觀察一些化學(xué)反應(yīng)是否完成，可以利用薄層色譜或紙色譜觀察原料色點(diǎn)的逐步消失，以證明反應(yīng)完成與否。 

吸附色譜主要是以氧化鋁、硅膠等為吸附劑，將一些物質(zhì)自溶液中吸附到它的表面上，而后用溶劑洗脫或展開，利用不同化合物受到吸附劑的不同吸附作用，和它們?cè)谌軇┲胁煌娜芙舛龋簿褪抢貌煌衔镌谖絼┥虾腿芤褐g分布情況的不同而得到分離。吸附色譜分離可采用柱色譜和薄層色譜兩種方式。 

柱色譜常用的有吸附色譜和分配色譜兩種。吸附色譜常用氧化鋁和硅膠為吸附劑。分配色譜以硅膠、硅藻土和纖維素為支持劑，以吸收較大量的液體作為固定相。 

柱色譜常用的吸附劑有氧化鋁、硅膠、氧化鎂、碳酸鈣和活性炭等。供色譜使用的氧化鋁有酸性、中性和堿性三種。堿性氧化鋁適用于碳?xì)浠衔铩⑸飰A以及其它堿性化合物的分離。中性氧化鋁應(yīng)用**廣，適用于醛、酮、醌以及酯類化合物的分離。酸性氧化鋁適用于有機(jī)酸類的分離。氧化鋁的活化分 I~V 五級(jí)， I 級(jí)的吸附作用太強(qiáng)， V 級(jí)的吸附作用太弱。所以一般常采用 II ， III 級(jí)。  

化合物的吸附性和它們的極性成正比，化合物分子中含有極性較大的基團(tuán)其吸附性較強(qiáng)。氧化鋁對(duì)各種化合物的吸附性按下列順序遞減。      

酸、堿 > 醇、胺、硫醇 > 酯、醛、酮 > 芳香族化合物 > 鹵代物、醚 > 烯 > 飽和烴。  

試樣吸附在氧化鋁柱上后，用合適的溶劑進(jìn)行洗脫，這種溶劑稱為洗脫劑。常用洗脫溶劑的極性按以下次序遞增:  

己烷、石油醚＜環(huán)已烷＜四氯化碳＜三氯乙烯＜二硫化碳＜甲苯＜苯＜二氯甲烷＜三氯甲烷＜乙醚＜乙酸乙酯＜丙酮＜丙醇＜乙醇＜甲醇＜水＜吡啶＜乙酸  

 

薄層色譜又叫薄板層析，是色譜法中的一種，是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，屬固-液吸附色譜，它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)，一方面適用于少量樣品（幾微克，甚**0.01微克）的分離；另一方面在制作薄層板時(shí)，把吸附層加厚加大，又可用來精制樣品，此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物質(zhì)。此外，薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。 

薄層色譜分為薄層吸附色譜與薄層分配色譜兩種，本節(jié)介紹的是薄層吸附色譜。薄層色譜是將吸附劑均勻地涂在玻璃板(或某些高分子薄膜)上作為固定相，經(jīng)干燥、活化后點(diǎn)上待分離的樣品用適當(dāng)極性的有機(jī)溶劑作為展開劑（即流動(dòng)相）。當(dāng)展開劑在吸附劑上展開時(shí)，由于樣品中各組分對(duì)吸附劑吸附能力不同，發(fā)生了無(wú)數(shù)次吸附和解吸過程，吸附能力弱的部分（即極性較弱的）隨流動(dòng)相迅速向前移動(dòng)，吸附能力強(qiáng)的組分（即極性較強(qiáng)的）移動(dòng)慢。利用各組分在展開劑中溶解能力和被吸附能力的不同，**終將各組分彼此分開。如果各組分本身有顏色則薄層板干燥后會(huì)出現(xiàn)一系列高低不同的斑點(diǎn)，如果本身無(wú)色，則可用各種顯色方法使之顯色，以確定斑點(diǎn)位置。在薄板上混合物的每個(gè)組分上升的高度與展開劑上升的前沿之比稱為該化合物的Ｒf值，又稱比移值。對(duì)于一個(gè)化合物當(dāng)實(shí)驗(yàn)條件相同時(shí)其Ｒf值是一樣的。