凝膠層析又稱分子篩過濾、排阻層析等。它的突出優(yōu)點是層析所用的凝膠屬于惰性載體,不帶電荷,吸附力弱,操作條件比較溫和,可在相當廣的溫度范圍下進行,不需要有機溶劑,并且對分離成分理化性質的保持有獨到之處。對于高分子物質有很好的分離效果。凝膠層析是按照蛋白質分子量大小進行分離的技術,又稱之凝膠過濾,分子篩層析或排阻層析 凝膠種類及性質
(一)交聯葡聚糖凝膠(Sephadex)
⑴Sephadex G交聯葡聚糖的商品名為Sephndex,不同規(guī)格型號的葡聚糖用英文字母G表示,G后面的阿拉伯數為凝膠得水值的10倍。例如,G-25為每克凝膠膨脹時吸水2.5克,同樣G-200克每克千膠吸水20克。交聯葡聚糖凝膠的種類有G-10,G-15,G-25,G-50,G-75,G-100,G-150,和G-200。因此,“G”反映,凝膠的交聯程度,膨脹程度及分部范圍。 各種葡聚糖凝膠的分離范圍與用途:
Sephadex G-10 葡聚糖凝膠 G-10 分離范圍<700 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 Sephadex G-15 葡聚糖凝膠 G-15 分離范圍<1500 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 Sephadex G-15 葡聚糖凝膠 G-15 分離范圍<1500 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 Sephadex G-25 葡聚糖凝膠 G-25 分離范圍 1000-5000 適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 Sephadex G-50 葡聚糖凝膠 G-50 分離范圍 1500-30000 Sephadex G-75 葡聚糖凝膠 G-75 分離范圍 3000-80000 Sephadex G-100 葡聚糖凝膠 G-100 分離范圍 4000-150000 Sephadex G-150 葡聚糖凝膠 G-150 分離范圍 5000-300000 Sephadex G-200 葡聚糖凝膠 G-200 分離范圍 5000-600000 ⑵
Sephadex LH-20,是─Sephadex G-25的羧丙基衍生物, 能溶于水及親脂溶劑,用于分離不溶于水的物質。
Sephadex LH-60,是─Sephadex G-50的羧丙基衍生物, 能溶于水及親脂溶劑,用于分離不溶于水的物質。 (3)
DEAE Sephadex A-25 DEAE葡聚糖凝膠 A-25 顆粒大小:40-120μm 分離大小:小蛋白及巨大分子
DEAE Sephades A-50 DEAE DEAE葡聚糖凝膠 A-50 顆粒大小:40-120μm,分離范圍:小蛋白及巨大分子 (4)
sephacryl:為葡聚糖偶聯丙烯基,再和甲叉雙丙烯酰胺聚合而成的介質。它有較高的硬度,能承受比普通凝膠更大的靜水壓力,由于屬于部分大網孔型凝膠,可用于分離蛋白質、核酸、多糖和蛋白聚糖甚**是病毒顆粒
Sephacryl S100分離范圍是1kD~100kD之間; Sephacryl S200分離范圍是5kD~250kD之間; Sephacryl S300分離范圍是10kD~1500kD之間 AKTA用此填料。 (二)瓊脂糖凝膠:瑞典稱sepharose;美*稱Bio-gel A;英*稱Segavac;丹麥稱Gelarose。Sepharose主要有三種型號:2B,4B,6B,阿拉伯數字表示凝膠中干膠的百分含量。
Bio-GA有6個型號:0.5M,1.5M,5M,15M,50M,150M。阿拉伯數字乘以1000000表示排阻限度。Sagavac分為:2F,4F,6F,8F,10F2℃4C6℃8C10℃阿拉伯數字表示凝膠中干膠的百分含量,F表示粉末狀,C表示顆粒狀。Gelarose有5種類型:2%,4%,6%,8%,10%。百分數表示干膠量。瓊脂糖凝膠屬于大孔膠,由于其工作范圍的下限幾乎相當于葡聚糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠的上限,所以多用于分離400000以上的物質,比如核酸和病毒。瓊脂糖凝膠是依靠糖鏈之間的次級鏈如氫鍵來維持網狀結構,網狀結構的疏密依靠瓊脂糖的濃度。一般情況下,它的結構是穩(wěn)定的,可以在許多條件下使用(如水,pH4-9范圍內的鹽溶液)。瓊脂糖凝膠在40℃以上開始融化,也不能高壓消毒,可用化學滅菌活處理。
Sepharose 6B 瓊脂糖凝膠 6B 分離范圍:1000-5000,適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 ConA-Sepharose ConA瓊脂糖凝膠 分離范圍:1000-5000,適用于脫鹽、肽與其它小分子的分離 DEAE Sepharose FF DEAE瓊脂糖凝膠 FF 分離范圍:3000-80,000 DEAE Sepharose CI-6B 瓊脂糖凝膠CI-6B 分離范圍:5000-300,000 (三)聚丙烯酰胺凝膠:
是一種人工合成凝膠,是以丙烯酰胺為單位, 由甲叉雙丙烯酰胺交聯成的,經干燥粉碎或加工成形制成粒狀,控制交聯劑的用量可制成各種型號的凝膠。交聯劑越多,孔隙越小。聚丙烯酰胺凝膠的商品為生物膠-P (Bio-Gel P),由美*Bio-Rod廠生產,型號很多,從P-2**P-300共10種,P 后面的數字再乘1000就相當于該凝膠的排阻限度。這種膠在極端ph下可被水解,水解后形成的羧基,具有離子交換的性質。
(四)聚苯乙烯凝膠商品為Styrogel , 具有大網孔結構, 可用于分離分子量1600到40,000,000的生物大分子,適用于有機多聚物,分子量測定和脂溶性天然物的分級,凝膠機械強度好,洗脫劑可用甲基亞砜